海洋光学亚洲 市场部07 十二月 2022
- 医疗与生命科学
蛋白质内的色氨酸残渣受紫外线激发可产生本征荧光。当蛋白质从折叠的自然状态进入变性状态的时候，发射光谱将轻微变化，反映了折叠构型的变化。
目的：
测定溶菌酶中处于天然态和变性状态色氨酸的本征荧光。
为了进行这个分析，对溶菌酶的天然和变性状态本征荧光进行了测量。溶菌酶为14.3 kDa 蛋白质，具有6色氨酸残基。色氨酸的激发波长为280 nm，发射波长350 nm。
实验条件：
下列样品送交分析：
- 0.5 mg/mL溶菌酶的K2HPO4溶液50 mM，pH值：7.4 -天然蛋白质
- 0.5 mg/mL溶菌酶的 K2HPO4溶液，pH值：7.4，6 M胍HCl -变性蛋白质
- 50 mM K2HPO4，pH值：7.4，50 mM K2HPO4，pH值：7.4，6 M胍HCl
将数毫升的溶菌酶溶液转移到一个石英试管，光程长1 cm。用UV-LVF-L滤光片使激发一侧300 nm以下的光通过。同时对缓冲剂的荧光进行了测量，以确保它们在使用条件下不发出荧光。
使用的硬件：
- USB2000 (USB2E4066) 光栅1
- UV2/OFLV-4探测器
- L2透镜
- 200 um光阑
- PX2脉动氙灯光源
- CUV-FL-DA 直插式试管托架
- UV-LVF-L UV低通线性可变滤波器
- CVD-DIFFUSE
- P600-2-UV-VIS（紫外线-可见光）
- 石英试管（CV-Q-10）
实验参数：
- 积分时间（ms）：500
- 光谱平均值：10
- 平滑次数：10
测量模式：
- 荧光
结果：
图1为天然和变性的溶菌酶溶液和缓冲剂测量的荧光光谱。注意：与蛋白质的折叠状态相关的荧光存在轻微的频变。